preventavir

Тест для определения активности аспарагиназы инструкция и описание

Тест для определения активности аспарагиназы МЕДОК (МААТ)
Количественный ферментативный тест для определения активности аспарагин азы.
Каталог № 550.
Только для диагностики ш vitro.
Энзим L-Аспарагин аза относится к базовым препаратов для лечения острого лимфобластного лейкоза у детей и взрослых.
Принцип действия аспарагин азы в ферментативном расщеплении аминокислот аспарагина в аспарагиновой кислоты и аммиака, что приводит к снижению аспарагина в плазме и ликворе (принцип работы теста см. Ниже).
С помощью этого теста возможно измерение активности аспарагин азы в процессе лечения, позволяет оптимизировать терапевтическое использование аспарагин азы. Мониторинг активностиаспарагин азы проводится с целью:
• Контроля значение активностиаспарагин азы в сыворотке крови в процессе терапии как суррогатного параметра, который характеризует разрушения аспарагина.
• Определение вызванного иммунным ответом "скрытой" инактивации, которая приводит в результате к сокращению продолжительности эффективного действия аспарагин азы.
• Обоснование рационального решения о необходимости замены на альтернативный препарат аспарагин азы или изменения режима дозирования.
МААТ тест medac - гомогенный тест для измерения активности аспарагин азы. Делает возможным достижение всихцилей, связанных с Мони ториюванням активности аспарагин азы.
принцип теста
аспарагин аза
Субстрат - - »продукт распада А + продукт розпадуВ
ферментативный гидролиз
Продукт распада В + хромоген -> зеленую окраску
-> Изменение абсорбции при длине волны 700 нм.
Аспарагин аза расщепляет субстрат, аналогичный аспарагина, на два продукта расщепления - А и В.
Освободившееся продукт распада Вутворюе в результате комплексной реакции с хромогеном окрашен в зеленый цвет продукт, определяет возможность абсорбционного измерения.
Оптическая плотность вимирюетьсяна длине волны 700 нм, активность сывороточной аспарагин азы определяется с помощью стандартной кривой.
преимущества метода
• Каждая микро лунка может быть раскрыта и использована отдельно.
• Простота методики, не требует отмывания или центрифугирования.
• Продолжительность выполнения теста -около 2:00.
• Высокая точность результатов анализа.
состав набора
Каталог № 550.
1. Пластина с микро лунками: 6ряд по 8 лунок в каждом (в рамке, вакуум герметично упакована в алюминиевый контейнер), легко раскрывается, U-образной формы, специально обработана.
2. Контроль 2 пробирки - 0,5 мл в каждой, аспарагин аза medac Е. Соlи в сыворотке человека, лиофилизированная.
3. Стандарт 2 пробирки - 0,5 мл в каждой, аспарагин аза medac Е. Соlи в сыворотке человека, лиофилизированная.
По. Стандарт 1: 600 Ед / л Сб. Стандарт 2 300 Ед / л Вс. Стандарт 3: 50 Ед / л 3d. Стандарт 4: 0 Ед / л
4. Растворитель образцов: 1 флакон- 110 мл, PBS / TWEEN / BSA, pH = 7,2-7,4, готовый к использованию, содержит ProClin ™ 300.
Субстрат: 2 пробирки - 0,75 мглу каждой, готовый к использованию, содержит ProClin ™ 300.
5. Хромоген 2 пробирки - 1 мглу каждой, концентрированный, Хи, раздражающий средство, R 36/38, S 26 миститьдиметилсульфоксид (EEC № 200-664-3).
6. Растворитель хромогена 2 пробирки - 2 мл В каждой, готов к использованию.
После окончания срока годности использование реагентов не допускается.
2. Реагенты и материалы, которые потребуются, но не входят в состав набора.
2.1. Микро пипетки соответствующего объема.
2.2 Чистые стеклянные или пластиковые емкости для растворения образцов и хромогена.
2.3. Фотометр для работы змикро лунками и фильтром с длиной волны 700 нм.
3. Подготовка реагентов.
Перед началом исследования все компоненты набора должны быть комнатной температуры.
Правильную килькистьмикро лунок.
3.1. Микро пластина.
После изъятия необходимого количества микро лунок алюминиевый контейнер должен быть плотно упакован. Условия хранения и стабильность неиспользованных микро лунок приведены в табл. 4.
3.2. Калибраторы и контроль.
Разведите каждый лиофилизованийконтроль и калибраторы с помощью 0,5 мл растворителя образцов. Аккуратно переверните закрытую пробирку для полного растворения всех частиц, которые согласились на пробку.
3.3. Растворения хромогена.
Обратите внимание: при смешивании с растворителем хромоген разогревается.
Смесь хромогена с растворителем не может и не должна сохраняться. ее необходимо использовать сразу же после приготовления.
Запрещается смешивать реагенты из разных наборов и других производителей.
Получение достоверных и воспроизводимых результатов возможно лишь при условии точного выполнения методики теста и использование специфических реагентов тест-набора.
4. Материал для исследования.
4.1. Тест предназначен только для исследования образцов сыворотки.
4.2. Предварительно подвергать сыворотку любым воздействиям для предотвращения инактивации. Сыворотка не должна быть контаминированная микроорганизмами, Хилезный или содержать эритроциты.
4.3. Сыворотку растворяют с помощью растворителя образцов в соотношении 1: 10 (т.е. 20 мкл сыворотки + 180 мкл растворителя образцов). Пробы со значениями показателей за пределами измерения подвергают большей разведению.
5. А. Методика анализа
5.1. Надрежьте алюминиевый контейнер для микро пластины над "молнией" и возьмите нужную килькистьмикрогумок (см. 3.1).
5.2. С помощью пипетки поместите умикро лунки пластины по 20 мкл контроля, калибратора и пробы.
5.3. Добавьте в каждую микро лунку 20 мкл субстрата.
Пипетирования калибраторов, контролей, проб и субстрата должно быть закончено за 10 минут. Аккуратно взболтайте содержимое тщательного перемешивания всех его компонентов. После этого сразу же начните инкубацию микро пластины.
5.4. Инкубируйте закрыты микро лункипластины течение 60 мин (± 2 мин) при комнатной температуре (22 ° С ± 1 ° С).
5.5. На момент окончания времени инкубации подготовьте раствор хромогена (см. 3.3).
5.6. Во все микро лунки пластины добавьте 100 мкл раствора хромогена.
5.7. Инкубируйте закрыты микро лункипластины течение 60 мин (± 2 мин) при комнатной температуре (22 ° С ± 1 ° С).
Равномерно перемешайте все компоненты путем осторожного встряхивания.
Следите за тем, чтобы перед фотометрическим анализом в лунках не было пузырьков воздуха.
Фотометрический анализ следует выполнять сразу после окончания последнего этапа инкубации.
5. В. Таблица проведения анализа.
Инкубация 60 мин при комнатной температуре (22 ° С ± 1 ° С).
Фотометрический анализ на длине волны 700 нм
6. А. Подсчет результатов (достоверность).
• Прочитайте показатели оптической плотности при длине волны 700 нм. Измерение оптической плотности blank проводите против воздуха.
• Обязательные показатели активности контроля напечатаны на этикетке пробирки. критерии достоверности
• Активность контроля должна находиться в пределах величин, указанных ,, (см. Этикетку на пробирке).
• Показатель оптической щильностикалибратора 1 должен быть> 1,500.
• Показатель оптической щильностикалибратора 4 должен быть <0,150.
Анализ следует повторить, если результаты не соответствуют специфическим!
Калибра тельный график и количественная оценка результатов
Показатели оптической плотности (ОЩ) калибраторов наносятся на график напротив показателей активности. Рекомендуем для построения калибровочного графика использовать "сubicspline approximation".
Стандартная калибровочная кривая позволяет определить показатели активности проб аспарагин азы согласно значенье оптической плотности.
Показатели измеряемых находятся в интервале от 30 до 600 Ед / л. Пробы с показателями ниже уровня, измеряемого, должны быть интерпретированы как имеющие значение активности <30 Ед / л. Пробы с показателями выше уровня, измеряемого, должны быть интерпретировано как имеющие значение активности> 600 Ед / л. Эти показатели не должны быть экстраполированы, их определение следует повторить при более высоком разведении.
Если проба была измерена при разведении большем, чем 1:10, значение активности аспарагин азы, которое определено по калибровочной кривой, необходимо умножить на дополнительный фактор разведения (например разведения пробы 1:40, определенная концентрация 250 Ед / л, реальная концентрация составит: 250 х 4 = 1000 Ед / л).
6. В. Интерпретация результатов / ограничения по использованию метода.
• С помощью medac теста определения активности аспарагин азы возможно измерение активности в сыворотке всех зарегистрированных коммерческих препаратов аспарагин азы.
• Калибровка теста здийснюетьсяаспарагин азой medac, что позволяет, применяя тест-кит, считывать точные количественные значения активности аспарагин азы medac, используя стандартную кривую. У пациентов, терапия которых проводится другими коммерческими препаратамиаспарагин азы, вследствие специфических различий в активности результаты измерений могут отличаться.
• Современные научные данные не позволяют однозначно определить предельные значения активности аспарагин азы, которые гарантируют 100% разрушения аспарагина, поэтому каждый раз предельные значения должны быть определены в соответствии с терапевтических целей каждого пользователя или, соответственно, исследовательской группы. Работа, опубликованная Riccardi et al (1981), указывает, однако, на то, что активность аспарагин азы> 100 Ед / л обеспечивает полное разрушение аспарагина. -высокие Концентрации гемоглобина и билирубина не влияют на результаты.
7. Характеристики проведения теста.
В процессе оценки диагностических возможностей были изучены такие характеристики проведения теста.
7. А. Физиологические значение активности аспарагин азы.
При оценке диагностических возможностей исследовались 102 пробы сывороток доноров. Измерить активнистьаспарагин азы в пробах оказалось невозможным. Во всех пробах активнистьаспарагин азы была менее 30 Ед / л. В дополнение к этому 52 пробы сывороток детей было исследованы на активность аспарагин азы. Показатели в этой популяции также были менее 30 Ед / л.
Std = калибратор; К = контроль; Nr. = Сыворотка; OD = оптическая плотность.
7. С. Воспроизведение
Среднее воспроизведения = 93,6% (SD = 9,9%) было вычислено при добавлении каждой из трех проб с разной активнистюаспарагин азы (аспарагин аза medac) до трех серий наборов реагентов.
7. Р. Линейность разведения.
Линейность разведения была проверена с помощью 10 высоко реактивных сывороток, которые были тестированы в 4-5ризних разведениях (каждое последующее в соотношении 1: 2 до предыдущего).
7. Е. Искривление результатов.
Результаты определения активности аспарагин азы до значений 20000 Ед / л НЕ искривляются.
7. Р. Пределы количественного анализа (нижняя граница измерения, LOG).
Нижний предел измерения равен 30 Ед / л. Общие рекомендации к проведению анализа.
• Для предотвращения перекрестной контаминации не путайте пробирки и крышки, которые им соответствуют.
• Сразу после использования реагенты должны быть герметично закрыты для предотвращения испарения и микробной контаминации.
• После использования реагенты должны быть немедленно размещены для хранения согласно инструкции, гарантирует их сохранность в течение срока годности.
• После использования все компоненты тест-набора должны храниться в оригинальной упаковке для предотвращения смешивания с реагентами других тест-систем или наборов (см. 3).
Информация о правилах безопасности.
• Необходимо соблюдать правила производственной техники безопасности в пределах утвержденных национальных норм.
• Реагенты, которые изготовлены из биологических жидкостей человека, тестируемые с отрицательным результатом на наявнистьНbsAs, АТ к ВИЧ 1 и 2 типа и НСV. Несмотря на это, настоятельно рекомендуется при работе с этими материалами, как и с материалами животного происхождения (см. Содержание набора), считать их потенциально контагиозными и использовать все необходимые меры.
• R 36/38: раздражает глаза ташкиру.
S 26: при попадании в глаза сразу промыть его большим количеством воды и обратиться за медицинской помощью.
Обсуждение проблемы удаления остатков.
Остатки химических веществ и препаратов является, как правило, опасными отходами. Удаление такого рода отходов регулируется национальными и региональными законами. Проконсультируйтесь с местными ведомствами и компаниями по удалению опасных отходов с целью получения рекомендаций по их уничтожению.
Условия хранения. Хранить в недоступном для детей месте. Хранить при температуре 2-8 ° С в защищенном от света месте.
Срок хранения. 1 год.

Новости медицины:


Резерв лекарств 0 шт.