Диски с антибиотиками для определения чувствительности микроорганизмов к лекарственным средствам инструкция и описание
Общая характеристика
Диски с антибиотиками используются для определения чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных заболеваний, выделенных из патологического материала больных.
Диски изготовлены из картона, который наделен специальными свойствами и насыщенный стандартными растворами антибиотиков определенной концентрации. Содержание антибиотика в диске, который указан на этикетке, соответствует рекомендациям ВОЗ. Для предотвращения насыщению влагой дисков во флаконы помещены вата гигроскопическая и силикагель технический индикаторный синего цвета.
Методика определения чувствительности
1. Питательная среда
Для определения чувствительности рекомендуется использовать питательный агар для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (среда АГВ) с содержанием триптического гидролизата кильки 25,0 г / л крахмала растворимого 0,5 г / л, натрия фосфорнокислого двозамищенного 1,0 г / л, агара 13 , 5 г / л при рН-7,4 + 0,2.
Для гемофильная микроорганизмов, которые не растут на обычном питательной среде, в указанное выше питательную среду добавляют 5% дефибринованои или гемолизированных крови.
2. Приготовление чашек
Расплавленное среду разливают по 15 мл в стерильные чашки Петри, диаметром 100 мм, расположенных на горизонтальной поверхности. Перед заражением поверхность застывшего среды подсушивают в течение 30- 40 минут.
3. Приготовление инокулята и нанесение его на поверхность агаровой среды
Инокулят готовят из чистой 18-20-часовой культуры бактерий, которые выросли на поверхности плотной питательной среды. Для этого 5-10 изолированных колоний суспендируют в жидкой питательной среде или в изотоническом растворе хлорида натрия. Как инокулят можно использовать чистую 18- 20 часовую бульонную культуру. Суспензию или бульонную культуру разводят изотоническим раствором хлорида натрия до мутности оптического стандарта на 10 ЕД, а затем полученную смесь разводят еще повторно в 20 раз.
Инокулят, общим об "объемом 1 мл, наносят на поверхность агаровой среды и равномерно распределяют путем ее покачивания. Остаток жидкости удаляют пипеткой. Полуоткрытые чашки Петри подсушивают при комнатной температуре в течение 10- 15 минут.
4. Наложение дисков
Диски с помощью пинцета размещают на поверхности зараженного питательной среды на одинаковом расстоянии друг от друга и примерно на расстоянии 2 см от края чашки. На одной чашке Петри необходимо размещать не более 5 дисков.
5. Инкубация чашек
Чашки инкубируют в термостате в течение 18- 20 часов, при t 35-37 ° С, с перевернутым до- вверх дном.
6. Учет результатов
С помощью линейки или измерителя (кронциркуля, штангенциркуля) проводят измерение диаметра зоны задержки роста вокруг дисков, включая при этом диаметр самих дисков с точностью до 1 мм. При не резко очерченных краях зон или зонах с двойными контурами необходимо проводить измерение зоны по наиболее четкому контуру.
7. Интерпретация полученных результатов
Оценка результатов производится согласно табл.1, которая содержит предельные размеры зон задержки роста для нечувствительных, умеренно чувствительных и чувствительных штаммов.
Полученные результаты (по диаметру зоны задержки роста) сравнивают с предельными значениями в табл.1 после чего распределяют штаммы изучаемых на три категории чувствительности.
8. Контроль воспроизведения и точности полученных результатов
Для контроля воспроизведения и точности процедуры определения чувствительности микроорганизмов к лекарственным средствам необходимо на каждую постановку теста параллельно с испытаны штаммами использовать эталонные штаммы: Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853).
Диаметры задержки зон роста эталонных штаммов должны соответствовать данным, изложенным в табл. 2.
Эталонные штаммы используют для проверки качества дисков, питательной среды и правильности методики постановки теста.
Условия хранения. Хранить в сухом, защищенном от света месте, при температуре от +4 до +8 ° С. Срок годности 1 год.
