Алкотестер инструкция и описание
АЛКОТЕСТЕР
НАБОР РЕАКТИВОВ
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор используется для количественного анализа этанола в биологических жидкостях (цельной крови, плазме, сыворотке, слюне и моче) и предназначен для использования в клинико-диагностической и научно-исследовательской практике, а также судмедэкспертизе в качестве средства первичного скрининга проб.
Набор пригоден для определения этанола в лекарственных препаратах, пищевых продуктах и ??бродильных средах.
Набор рассчитан на 100 анализов (при объеме проб 4 мл).
Набор хранить при температуре от 00С до + 80С.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Этанол при воздействии алкоголь оксидазы окисляется кислородом воздуха до ацетальдегида и перекиси водорода. Последний в с впряженных пер оксидазный реакции окисляет хромоген к цветному продукта, который определяется фотометрически:
алкоголь-
СН3СН2ОН + О2 оксидаза СН3СН + Н2О2
SН2 + Н2О2 пер оксидаза S + 2Н2О
краситель
РЕАКТИВЫ
1. "Хромоген". Сухая смесь хромогена с составляющими фосфатного буфера (2,45 г).
2. "Ферменты". Стабилизирована суспензия алкоголь оксидазы и пер оксидазы в сульфат аммония.
3. "Стандарт". Калибра тельный раствор этанола, 10 г / л (стабилизированный).
4. "осадителями" .40% -ный раствор три хлоруксусной кислоты (10 мл).
Дополнительный реактив 0,8 М НСИ (концентрированную соляную кислоту разводят в 15 раз водой 10 мл кислоты + 140 мл воды).
Допустимая величина содержания алкоголя
В биологической жидкости ЧЕЛОВЕКА
Сыворотка, плазма и цельная кровь - до 0,25 г / л (пороговая норма).
Превышение величины 1 г / л принимается как юридическое доказательство алкогольного опьянения.
Видтворювальнисть (коэффициент вариации) - (5-7)% (в зависимости от диапазона концентраций).
Линейность калибровочной кривой - до концентрации алкоголя 4,5 г / л в исходной пробе (до 45 мкг спирта в фотометрируемых растворе), что соответствует оптической плотности до 1,0 - 1,3.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО реагента
1. "Хромоген". Содержимое флакона 1 поместить в термостойкий стакан или колбу на 0,5 л, добавить 350 мл дистиллированной воды и нагреть смесь до полного растворения. Перед использованием раствор охладить до комнатной температуры.
Хранить раствор в герметически закрытом сосуде при температуре от + 80С до + 200С в затемненном месте до 2-х недель.
2. "Реагент". В день анализа поместить взболтанных суспензию ферментов с флакона 2 в приведен к комнатной температуры раствор хромогена и смесь хорошо размешать.
Реагент используют в день приготовления.
П р и м е ч а При проведении меньшего числа анализов готовят соответствующее количество реагента, смешивая раствор хромогена и взболтанных суспензию ферментов в соотношении 700: 1, а именно:
Vxp = 3,5 · N (мл) Vе = 0,5N / 100 (мл)
где Vxp - объем раствора хромогена, мл; Vе - объем суспензии ферментов, мл; 0,5 - паспортный объем суспензии ферментов, мл; N - число анализов (включая слепую и калибровочную пробы).
3. "Стандарт". Развести стандартный раствор этанола в 10 раз водой (0,1 мл + 0,9 мл Н2О).
Раствор используют в день приготовления как калибрант с концентрацией 1 г / л.
П р и м е ч а: Все операции со спиртом следует проводить очень тщательно, предотвращая случайное попадание его в реагенты.
4. "осадителями". Содержимое флакона 4 (10 мл 40% ТХУ) развести в 10 раз водой (добавить 90 мл Н2О).
П р и м е ч а: "осадителями" является концентрированным раствором сильной кислоты, поэтому при работе с ним необходимо соблюдать соответствующие правила техники безопасности.
ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
Длина волны - 450 нм (спекрофотометр или фотоколориметр).
Кюветы 1 см.
Температура инкубации - комнатная (около 200 ° С).
Подготовка проб крови (сыворотки или плазмы).
В небольшие стеклянные пробирки вносят по 0,1 мл проб только взятой крови (для дезинфекции используют водный раствор риванола), добавляют к ним по 0,9 мл разведенного (4%) раствора "осадителя" и встряхивают. Пробы выдерживают при комнатной температуре 5 мин и центрифугируют для осаждения белков при 3000 об / мин в течение 10 мин. Для анализа используют над осадочную жидкость.
Аналогично обрабатывают слепую и калибрувальу пробы.Реакцию запускают добавлением рабочего реагента в точно фиксированное время с интервалом, например, в 30 с между пробами.
Останавливают реакцию через 20 мин добавлением ко всем проб по 0,5 мл 0,8 М НСИ в той же временной последовательности, выдерживалась при внесении рабочего реагента.
Пробы фотометрируют при 450 нм против слепой. Реакционная смесь перед добавлением кислоты имеет голубую окраску, которая в кислой среде переходит в желтое.
Расчет концентрации алкоголя (в г / л или промилле 0/00) в каждой серии проводят по своей калибровочной пробой по формуле:
С = Ед / Еккл
где Эд и Еккл - оптические плотности исследовательской и калибровочной проб соответственно, измеренные против слепой пробы.
ПРИМЕЧАНИЯ. 1. Время инкубации можно изменять (10-25 мин), но соблюдение одинакового времени для всех проб является обязательным.
2. При определении алкоголя в моче операцию осаждения белков опускают и при анализе используют 0,02 мл мочи, а в калибровочной пробе - 0,02 мл раствора этанола с концентрацией 1 г / л.
Время инкубации - 10 мин. Формула расчета такова же, как приведена выше.
3. Для сыворотки крови (но не цельной крови) допустимо проводить экспресс-анализ и без осаждения белков. Для этого используют 0,02 мл сыворотки, а в калибровочной пробе - 0,02 мл раствора этанола с концентрацией 1 г / л. Время инкубации - 10 мин. Формула расчета не меняется. Погрешность при анализе алкоголя несколько возрастает, однако для экспрессного выявления алкогольного опьянения (С> 1 г / л) такой вариант допустим.
4. При проведении анализа недопустима наличие в лаборатории паров метанола, этанола и других спиртов и летучих окисляющих и восстанавливающих агентов.
5. При наличии в лаборатории фотоэлектроколориметра с уменьшенным объемом фотометрируемых проб (0,5 - 1,0 мл), например, "Мефан-8001", можно пропорционально уменьшить дозу реагентов на всех этапах определения.
6. алкогольоксидазы специфическая как к этанолу, так и метанола (причем последний окисляется в 10 раз эффективнее), поэтому в особых случаях для выявления метилового спирта следует провести газо-жидкостной хроматографии.
Срок хранения. 6 месяцев.
Упаковка. По 4 флакона в коробке.
